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猪粪中黑水虻幼虫抗菌研究

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发表于 2015-9-19 09:30:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
猪粪中黑水虻幼虫抗菌研究

  
学生姓名:胡启明
  
  
学生学号:20051305015
  
  
学生专业:生物工程
  
  
指导教师:张吉斌
  
华中农业大学生命科学与技术学院

猪粪中黑水虻幼虫抗菌性研究
摘要

以107 cfu/g个大肠杆菌接种于已灭菌的50 g猪粪中,同时将大约有125只黑水虻幼虫(约10 g)接种到猪粪中并且与大肠杆菌混匀,另以猪粪中只加大肠杆菌不加黑水虻幼虫和猪粪中只加黑水虻幼虫不加大肠杆菌为对照。在27℃的情况下培养72 h,发现黑水虻幼虫对大肠杆菌有抑制作用。采用类似的方法进行黑水虻幼虫对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的实验,发现也有一定的效果。本研究为黑水虻幼虫抗菌活性物质的研究提供了基础。

关键词

黑水虻幼虫,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌,猪粪




















Black soldier flylarvae reduce bacteria in swinemanure

Abstract

Escherichia coli was inoculated into 50 gsterile pig manure at 107 cfu/g. Approximately 125 black soldier flylarvae(about 10g) were placed in pig manure inoculated and homogenized with E.coli. Pig manure inoculated with E.coli but without black soldier fly larvae and pig manure inoculated withblack solider fly without E. coliserved as the control. larvae were introduced into 50 g manure inoculated with E. coli and stored for 72 h at .27℃ and I found the black solider flies can reduce E. coli counts.Atthe same time ,I found the black solider flies can reduce the  Staphylococcus aureus counts and the Salmonella counts too with thesimilar method. This studyprovides the basis for the study, the antibacterial activity of black soldier fly larvae.


Key words

black soldier fly larvae, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella, swine manure















1 前言
1.1黑水虻幼虫研究的背景
随着人口的增长,对畜牧业产品的需求也日益增加,与之同时动物的粪便量也会上升。就目前来说全球每年要产生7万吨的粪便(Turnell et al, 2007),日后粪便的量也就可想而知。这些粪便若处理不好就会造成严重的空气污染、水资源污染以及土壤污染。
针对这一全球性的环境问题,人们也提出了很多种处理方法。在过去人们通常将这些粪便作为土地肥料处理(Bekele et al, 2006.),但是这种做法导致了这些土地成为可溶性的磷污染源(Turner et al, 2005)。因而现在人们做了很多针对动物粪便的可行性研究,堆肥就是其中一种常见的方法。堆肥就是在人工控制下,在一定的温度、湿度、碳氮比和通风条件下,利用自然界广泛分布的细菌、放线菌、真菌等微生物的发酵作用,人为地促进可生物降解的有机物向稳定的腐殖质生化转化的微生物学过程,即人们常说的有机肥腐熟过程。堆肥法可以提高动物粪便中的碳源的氧化,并且这一过程可以大大的减少粪便的量,剩下的堆肥可以作为如小麦等植物的肥料(Erickson et al,2004)。堆肥方法通常有三种。一种按是否需要氧气划分,有好氧堆肥(有氧状态)和厌氧堆肥(无氧状态);另一种是按堆肥温度分,有高温堆肥和中温堆肥;一种是按机械化水平分,有露天自然堆肥和机械化堆肥(常建一等,2003)。习惯上人们都按好氧堆肥和厌氧堆肥区分。现代化堆肥工艺基本都是好氧堆肥,这是因为好氧堆肥具有温度高、基质分解比较彻底、堆制周期短、异味小、可以大规模采用机械处理等优点。虽然这种方法有这些好处,但其弊端却更为明显。动物肥料一般会包含有病原体如大肠杆菌O157,H7(Fremaux et al, 2006;Williams et al, 2006).堆肥虽然能在高温情况下会抑制大肠杆菌的生长,但不能一直保持。从而可能会导致其依然存活。因此潜在的微生物污染,土壤和植物的相关应用不足导致堆肥仍然值得关注。
黑水虻幼虫可以减少粪便中的病原体(Erickson et al, 2004)。Erickson 等人确定在家禽粪便中黑水虻幼虫能够抑制大肠杆菌O157,H7和沙门氏菌。他们还检测了黑水虻幼虫在牛粪和猪粪中抑制病原菌的能力。刘巧林等人则证明黑水虻幼虫能够在牛粪中抑制大肠杆菌的生长。刘巧林的实验的确定了不同的温度下和提供不同的粪便时都会影响到水虻幼虫的抑菌效果,并且在最后确定了在27℃时水虻的抑菌效果最好。
1.2 黑水虻
黑水虻(Black soldier fly),Herrnetht illucens L.为双翅目Diptera水虻科Stratiomydiae昆虫(James ,1935),起源于美洲,现在美洲、欧洲、亚洲、非洲,澳洲,新西兰和多个太平洋岛屿上都有其踪迹(Cadlala ,etal,1974)。
黑水虻的生长发育分为卵期、幼虫期、蛹期和成虫期。幼虫期又分为6个不同的龄期黑水虻幼虫在恒温(27.8℃)下可以快速生长,孵化后12  d可以长到17 毫米长,在孵化后21 d可以完成幼虫龄期(May ,1961)。
黑水虻幼虫在自然界以腐烂的有机物和动物粪便为食,如发酸的番荔枝、南瓜和死亡的螃蟹,腐烂的水果、蔬菜酱、动物尸体等(May ,1961)。研究发现,黑水虻的幼虫集中取食动物粪便,不仅可以减少粪便堆积和臭气(Sheppardet al,1994),还能够控制家蝇的滋生(Sheppard ,1983;Bradley et al,1984),并减少粪便中大肠杆菌的数量(Erielmon et al,2004)。黑水虻的幼虫被用来处理咖啡加工的废弃物(Larde ,1990)、鸡粪、牛粪(Newton et al,1977)、猪粪(Larry et al,1959),并取得良好的效果。
1.3黑水虻幼虫的研究现状
Hermetiaillucens L对黑水虻幼虫研究发现黑水虻幼虫是消耗动物粪便的一个方法。他们标记减少的家禽和干的牛粪重量。在牛粪中黑水虻幼虫可以分别减少磷61%到70%,氮30%到50%(Myers et al,2008)。另外在家禽粪便94%到100%的抑制家蝇的数量(Sheppard, 1983)。Bradley和 Sheppard确定当存在黑水虻幼虫时在家禽的粪便中野生的家蝇的产卵量减少97%(Newton et al,1977)。采用新的方法来消除在的水污染、土壤污染以及空气污染也是迫在眉睫用水虻来处理粪肥,一方面能够大量减少粪便的质量,一方面又能够抑制病原细菌的生长。幼虫取食过程中能够通过含有消化酶的分泌物抑制微生物的生长,还能在体内消化多种病原微生物,如霍乱、疟疾病原物等,另外,还发现黑水虻幼虫能够有效地抑制家蝇种群的繁殖,家蝇成虫通常避免在有水虻幼虫存在的有机物上产卵。同时黑水虻的幼虫和预蛹含有大量的蛋白、脂肪,还能够用于生产具有较高经济价值的动物饲料,因此其被认为是一种极有应用前景的资源昆虫。
美国佐治亚大学谢泼德教授领导的研究小组做了大量的工作,目前已经进入到应用阶段,并于1994年在墨西哥成功开发了世界上第一个水虻粪肥管理系统,用于处理集约经营的鸡场产生的大量粪便,将其转化为高附加值的动物蛋白饲料
1997年,美国环保工程技术公司的奥利弗博士首次将黑水虻技术应用于城市生活垃圾的处理,经过长期探索和研究,发明了一种适用于家庭的黑水虻有机垃圾生物转化器 2006年,中国广东省昆虫研究所的安新城博士着手吸收和引进黑水虻技术,并于当年的9月成功建立了黑水虻的本地实验种群,开始一系列的基础研究,并在产卵诱集和幼虫孵化方面取得突破性进展 。2007年4月,在前人研究的基础上,将相关技术合理优化组合,设计了一个用于高效率大量处理有机垃圾的生物转化系统,目前已经进入小试和专利申请阶段 。广东昆虫研究所展出的黑水虻餐饮垃圾生物处理器。处理器通过黑水虻的取食过程将餐饮、厨余等有机垃圾转化为高附加值的昆虫蛋白,安装有油水分离器、电气自动化控制系统、自动清洁防腐系统和生物除臭系统,每台每天最大处理量可达360千克,产出的黑水虻幼虫是优质的动物蛋白饲料,处理残余可直接用作有机肥,能够很好地实现有机垃圾的减量化、无害化和资源化。
1.4 黑水虻幼虫的饲料价值
黑水虻幼虫和预蛹的饲料价值研究。多位研究人员对黑水虻幼虫和预蛹的粗白质含量、粗脂肪含量、氨基酸组成和微量元素组成进行了研究。取食不同粪便生长的黑水虻幼虫在不同营养成分的含量上略有差别,Newton等报道,黑水虻幼虫含有42%-43%的干物质,其中干物质的粗蛋白达到42%-44%,粗脂肪31%-35%,灰份11%-15%,钙质4.8%-5.1%,磷0.60%-0.63%(NewtonG.L. et al,1995)。并根据Hrry等的数据,给出了取食猪粪和牛粪生长的黑水虻幼虫营养成分含量。黑水虻幼虫干粉的蛋白质含量低于鱼粉,和豆粕相近,取食猪粪的幼虫粉粗蛋白含量略高于取食牛粪的幼虫粉。黑水虻幼虫的粗脂肪含量比鱼粉和豆粕高,无氮浸出物的含量比豆粕和鱼粉低,粗灰份的含量也较高。黑水虻的幼虫收集起来比较困难,但幼虫生长到预蛹期后,需要寻找化蛹场所,一般会从饲养的基质中爬出,这种行为能够用于自动化收集黑水虻预蛹(喻国辉等,2009)。取食鸡粪的黑水虻预蛹磷和粗脂肪含量比取食猪粪的高,粗蛋白含量则相对略低黑水虻预蛹的锌、锰、铁的含量明显高于鱼粉和豆粕。适口性实验的结果表示,用幼虫配置的饲料与添加脂肪的豆粕粉配置饲料无差。同时结合鱼类加工的废弃物与粪便饲养黑水虻,能够显著提高黑水虻预蛹的饲料价值,主要是提高预蛹脂肪替代鱼油的价值(St-HilaireS. et al,2007)。
1.5 本实验的内容
黑水虻幼虫不仅具有极高的饲料价值同时还具有很高的免疫学价值。本文就黑水虻幼虫的抗菌性进行探讨。这个研究的目的主要是研究黑水虻幼虫对常见的细菌的影响以便为提取抗菌物质打下基础。
2 材料和方法
2.1 细菌和黑水虻幼虫的来源以及培养基的配制
该抑菌实验中共用到大肠杆菌(Escherichia coli),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),沙门氏菌([url=]Attenuated salmonella[/url])三种细菌。实验中针对不同的细菌采用不同的培养基。
2.1.1 大肠杆菌和培养基
为了便于细菌培养和计数,实验中先后用到了三种大肠杆菌:不带标记的大肠杆菌,带有氨苄标记的大肠杆菌以及带有氨苄和卡纳两种标记的大肠杆菌。在使用带有标记的大肠杆菌时所使用的培养基都相应的含有该种抗生素,以防止别的杂菌污染。
LB培养基
将下列组分溶解在0.9 L水中:
蛋白胨 10 g
酵母提取物 5 g
氯化钠 10 g
如果需要用 NaOH调整pH至7.0,再补足水至1 L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12 g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2.1.2 金黄色葡萄球菌和培养基
实验中金黄色葡萄球菌也曾用到两种即不带抗性标记的和带有氨苄抗性标记的金黄色葡萄球菌。为了利用观察计数,在培养金黄色葡萄球菌时采用的是金黄色葡萄球菌显色培养基。
金黄色葡萄球菌显色培养基 (RFP)
改良BP基础 48.0 g/L。
琼脂 10 g/L
RFP 添加剂: 30 瓶5 ml
缓冲蛋白胨水(BP)培养基
蛋白胨l0 g
NaCL 5 g
Na2HPO4.12H20 9 g
H2PO4  1.5 g
蒸馏水1000 ml
pH  7.2。
2.1.3沙门氏菌和培养基
与此同时沙门氏菌也先后采用了两种培养基进行培养,第一代ss琼脂培养基和第二代ss琼脂培养基。
SS琼脂培养基
牛肉膏 5 g
眎胨 5 g
三号胆盐 3.5 g
琼脂 17 g
蒸馏水 1000 ml
再将两液混合,121℃高压灭菌15 min,保存备用。
完全培养基:
基础培养基 100 ml
乳糖 10 g
柠檬酸钠 8.5 g
硫代硫酸钠 8.5 g
10%柠檬酸铁溶液 10 ml
1%中性红溶液 2.5 ml
0.1%煌绿溶液 0.33 ml
加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH 7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48 h内使用。
②煌绿溶液配好后应在10 d以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
2.1.4黑水虻的来源
新生的黑水虻幼虫是来自于德克萨斯州的A&M AgriLife Research Center,Stephenville,在27℃的情况下培养15天并以20 %玉米粉, 30 %苜蓿 豆粕,麸皮50 %为饲料。每个实验使用大约125个幼虫合10克。
2.2 收集处理猪粪
我的实验中所用的猪粪都是从学校旁的养猪场中所得。先后分别用了两种一种是普通的猪粪另一种是种猪的猪粪。现在的大型养殖业在其所用的饲料中多少都会有抗生素,这样不仅可以帮助牲畜的抗病能力同时还能够促进生长。实验中的两种猪粪的区别在于后一种不含抗生素。实验中所用的猪粪都是采用方便袋装好然后在放到-20℃进行冷冻一周,在需要使用时取出解冻到室温才可使用。实验时需先以每瓶50 g装入500 ml的玻璃瓶中然后再在121℃下灭菌30 min。中性的粪便在接种之前需要进行稀释,实验用的粪便的湿度约为72%。
2.3 方法
该实验在给定温度和黑水虻幼虫的密度情况下以确定在猪粪中黑水虻幼虫对一些病原菌是否具有抑制作用。
初步实验是用来确定在猪粪中的黑水虻幼虫在有病原菌的情况下能够表现的活性或者说是黑水虻幼虫在第几天的时候会表现出活动减弱甚至死亡。50 g猪粪中接种病原菌后,放在27℃,湿度60%-70%培养在96 h时观察发现黑水虻幼虫的活力很弱。根据这个现象因而所有的实验都只测到72 h时黑水虻幼虫对病原菌的作用情况。
此次实验在结合刘巧林的黑水虻幼虫在牛粪中对大肠杆菌的抑制实验的基础上设计的。一种细菌的实验为例如大肠杆菌。实验分为三组,三瓶中加入50 g猪粪后灭菌回复室温才可使用。第一组猪粪中只加入大肠杆菌5 ml,第二组猪粪中只加入黑水虻幼虫125条即10 g,与此同时第三组实验组则既加入大肠杆菌   5 ml用灭过菌的勺子将其混匀后又加入黑水虻幼虫10 g。菌液的浓度是以0.85的生理盐水为对照是的OD6000.3左右即可。为了避免黑水虻幼虫自身带入细菌影响实验,因而在加入黑水虻幼虫之前需先洗净。先用自来水洗净黑水虻幼虫身上所带的饲料,在不见有明显的赃物后再用95%的酒精洗10-15 min,洗净后再用0.85%的生理盐水洗净黑水虻幼虫身上所带的酒精,这一过程为了洗净完全需多重复几次。将黑水虻幼虫洗净后,再用已灭菌的纱布上将水吸干。干的黑水虻幼虫放入灭菌的平皿中称量10 g。这主要是因为量大,所以采用称量以估计条数。黑水虻幼虫的称重必须在超净工作台中操作。
三组猪粪都至于27℃湿度60%-70%的温箱中培养,每24 h测一次。每次都是使用灭菌的勺子从三玻璃罐子中取出猪粪,放在灭菌的平皿中称量10 g。实验组称量中带有的黑水虻幼虫出不用将其再放入瓶中。初步认为黑水虻幼虫在猪粪中是和搅拌混匀的大肠杆菌一样是均匀地分布在猪粪中。每称量一次后为了防止将其中的细菌等带入下一组,勺子都是要求在酒精灯上烧已灭菌。如此反复从三瓶猪粪中各称量出10 g。再将这10 g的粪便放于200 ml0.85%的生理盐水的   250 ml的三角瓶中放入300 r/min的摇床培养15min。取上层清的菌液进行稀释涂平板。称量猪粪和将10 g猪粪放入200 ml0.85%的生理盐水这过程都是要求在超净工作台中操作。
2.4 细菌的生长条件以及计数
为了细菌能够很好的生长方便计数,不同的细菌采用不同的培养基培养。
2.4.1 水虻对大肠杆菌生长的影响
在接种粪便样品前,没有标记的大肠杆菌需要先在27℃下的LB培养基上培养,培养到以0.85的生理盐水为对照时,测得的OD6000.3左右为止。大肠杆菌以接种前的每毫升的菌落数为稀释梯度,以体积重量比为1:100的比例即5 ml加入50 g灭过菌的猪粪中。再用灭过菌的勺子将其混匀,再向猪粪中加入125条即10 g的幼虫。在使用有氨苄标记的大肠杆菌的时候,方法同不带标记的大肠杆菌类似即在接种粪便样品前,有氨苄青霉素标记的大肠杆菌需要先在27℃的含有氨苄青霉素的LB培养基培养到以0.85的生理盐水为对照是的OD6000.3左右为止。该种大肠杆菌加入的量也为5 ml,再用灭过菌的勺子将其混匀,再向猪粪中加入125条即10 g的幼虫。同理,在使用带有氨苄青霉素和卡那霉素两种标记的大肠杆菌时,也是需要先在27℃的含有氨苄青霉素和卡那霉素两种抗生素的LB培养基培养到以0.85的生理盐水为对照是的OD6000.3左右为止。该种大肠杆菌加入的量也同其他两种大肠杆菌量相同也为5 ml,也需要再用灭过菌的勺子将其混匀,再向猪粪中加入125条即10 g的幼虫。无论猪粪中含有哪种大肠杆菌先培养过后,取十克的粪便于200 ml0.85%的生理盐水的250 ml的三角瓶中放入300 r/min的摇床培养15 min。取上层清的菌液进行稀释涂平板。不同的大肠杆菌在上文所提到的各自的LB培养基上计数。
2.4.2 水虻对金黄色葡萄球菌生长的影响
同样在接种粪便样品前,没有标记的金黄色葡萄球菌需要先在27℃下的LB培养基上培养,培养到以0.85的生理盐水为对照时,测得的OD6000.3左右为止。后来为了方便计数采用了金黄色葡萄球菌显色培养基代替了LB培养基。金黄色葡萄球菌以接种前的每毫升的菌落数为稀释梯度,以体积重量比为1:100的比例即5 ml加入灭过菌的猪粪中。再用灭过菌的勺子将其混匀,再向猪粪中加入125条即10 g的幼虫。与此同时,在使用带有标记的金黄色葡萄球菌时,也是需要先在27℃的含有氨苄青霉素这种抗生素的LB培养基培养到以生理盐水为对照是的OD6000.3左右为止。然后再用灭过菌的勺子将其混匀,再向猪粪中加入125条即10 g的幼虫。无论猪粪中含有哪种金黄色葡萄球菌先培养过后,取十克的粪便于200 ml0.85%的生理盐水的250 ml的三角瓶中放入300 r/min的摇床培养15 min。取上层清的菌液进行稀释涂平板。然后再根据实际情况是使用LB培养基还是金黄色葡萄球菌显色培养基进行培养计数。
2.4.3 水虻对沙门氏菌生长的影响
同样在接种粪便样品前,沙门氏菌先在27℃的ss琼脂培养基上培养,培养到以0.85的生理盐水为对照时,测得的OD6000.3左右为止。因效果的原因先后采用了第一代ss琼脂培养基和第二代ss琼脂培养基。沙门氏菌以接种前的每毫升的菌落数为稀释梯度,以体积重量比为1:100的比例即5 ml加入灭过菌的猪粪中。再用灭过菌的勺子将其混匀,再向猪粪中加入125条即10 g的幼虫。取10 g的粪便于200 ml0.85%的生理盐水的250 ml的三角瓶中放入300 r/min的摇床培养15min。取上层清的菌液进行稀释涂平板。沙门氏菌在上文所提到的ss琼脂培养基上计数。
3 结果与讨论
3.1 黑水虻幼虫对大肠杆菌的影响
从表1可以清楚地看出由于大肠杆菌的生活环境不是其理想的环境的影响,大肠杆菌随着时间的推移有一定的减少。但是同加入了黑水虻幼虫的实验组相比,其减少的幅度要大的多。根据显著性分析(P<0.05)经计算得t=2.446,t0.95(3)=2.353即t>t0.95(3),可以认为黑水虻幼虫对大肠杆菌的抑制具有显著性。黑水虻幼虫在第一天和第三天的时候对大肠杆菌的抑制效果最强。同时我们可以了解到黑水虻幼虫虽然能够抑制大肠杆菌的生长但其不能够完全杀死大肠杆菌。不同的是刘巧林的实验数据表明在牛粪中黑水虻幼虫会减少大肠杆菌的数量,但用猪粪喂养的黑水虻幼虫提高了大肠杆菌的存活率,我的结果与她的结果相反。
1猪粪中黑水虻幼虫对大肠杆菌的影响
Influenceof black soldier fly on Escherichiacoli in swine manure
实验时间
  
(h)
不同时间粪便中大肠杆菌的菌数(cfu/g)
处理组
  
(加黑水虻幼虫)
CK组
  
(不加黑水虻幼虫)
0
  
24
  
48
  
72
(1.0±0.1)×10
  
(1.0±0.1)×105
  
(7.9±0.1)×104
  
(1.0±0.1) ×102
(1.0±0.1)×107
  
(2.5±0.2)×106
  
(2.0±0.3)×106
  
(1.0±0.1)×104

3.2 黑水虻幼虫对金黄色葡萄球菌的影响
表2中的实验结果根据显著性分析(P<0.05)经计算得t=10.034,t0.95(3)=2.353即t>t0.95(3),表明黑水虻幼虫能抑制金黄色葡萄球菌效果明显。黑水虻幼虫在第一天和第三天时对金黄色葡萄球菌的作用强烈,并且以第三天时最强。金黄色葡萄球菌在不是最适宜的环境下也有所死亡。与大肠杆菌相同,在实验的结束时仍然有金黄色葡萄球菌的残留说明黑水虻幼虫不能够完全杀死金黄色葡萄球菌,但是有抑菌的效果。







2猪粪中黑水虻幼虫对金黄色葡萄球菌的影响
Influenceof black soldier fly on Staphylococcusaureus in swine manure
实验时间
  
(h)
不同时间粪便中金黄色葡萄球菌的菌数(cfu/g)
处理组
  
(加黑水虻幼虫)
CK组  
  
(不加黑水虻幼虫)
0
  
24
  
48
  
72
(1.0±0.1)×107
  
(1.2±0.2)×105
  
(1.6±0.1)×104
  
320±36
(1.0±0.1)×107
  
(1.0±0.1)×106
  
(3.2±0.2)×104
  
1000±130
3.3 黑水虻幼虫对沙门氏菌的影响
表3中的实验结果根据显著性分析(P<0.05)经计算得t=6.032,t0.95(3)=2.353即t>t0.95(3),表明黑水虻幼虫能够抑制沙门氏菌。黑水虻幼虫在第一天和第三天时对沙门氏菌抑菌效果较好。与此同时,黑水虻幼虫在这一组实验中向外跑的现象明显比其他的两组强烈。这说明黑水虻幼虫虽然能够抑制沙门氏菌的生长,但同时也表明沙门氏菌能够反作用于黑水虻幼虫。由此可见研究黑水幼虫同其他的微生物之间的关系也有必要。
3 猪粪中黑水虻幼虫对沙门氏菌的影响
Influenceof black soldier fly on Salmonella enteritisin swine manure
实验时间
  
(h)
不同时间粪便中沙门氏菌的菌数(cfu/g)
处理组
  
(加黑水虻幼虫)
CK组  
  
(不加黑水虻幼虫)
0
  
24
  
48
  
72
(1.0±0.1)×107
  
(5.0±0.2)×105
  
(1.2±0.3)×104
  
(1.0±0.2)×104
(1.0±0.2)×107
  
(1.0±0.1)×106
  
(3.2±0.2)×106
  
(1.0±0.4)×106
将表1,表2以及表3相对比来看,黑水虻幼虫不是对所有的细菌的抑菌效果相同。黑水虻幼虫对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制效果比对金黄色葡萄球菌的效果要强。大肠杆菌和沙门氏菌都为革兰氏阴性菌而金黄色葡萄球菌则为革兰氏阳性菌,由此可见黑水虻幼虫可能对革兰氏阴性菌的抑制作用明显的强于革兰氏阳性菌。但通过显著性检验发现金黄色葡萄球菌的显著性要强于大肠杆菌和沙门氏菌,可能是金黄色葡萄球菌重复的次数相对少一些所造成的误差。这一结论还需要实验才能够证实。
虽然实验能够得到黑水虻幼虫对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌有抑制现象,但是实验中个别结果不是很理想。在完成实验的过程中发现一些问题。我所做的实验中黑水虻幼虫没有明显的增重现象。这个现象可能与粪便中的水分的减少,粪便的消耗以及细菌同黑水虻幼虫的相互作用有关。粪便量和黑水虻幼虫的数量以及实验温度和实验水分等实验因素在本实验中都没有进行考虑,究竟这对实验数据是否有影响还不得而知。因而本实验还有待进一步的进行,优化粪便与水虻幼虫的比例,优化温度,优化处理时间,优化抑菌中的影响因素等。还需要确定黑水虻幼虫是哪一天的抗菌效果最好以及黑水虻幼虫抗菌物质产生的部位,并分析抗菌物质的特性。

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