价值数万元的博士论文资料----日粮维生素D_3水平对黄鳝免疫调控及免疫功能影响的研...

谷雨

本试验通过在日粮中添加不同水平的VD3,研究其对黄鳝免疫相关基因的表达、外周免疫器官的细胞、组织形态学变化、免疫功能和生产性能等方面的影响,以期探讨VD3对黄鳝免疫功能和免疫调控机制的影响,并初步筛选出提高黄鳝免疫应答的日粮VD3适宜添加水平,逐步积累、充实和拓展黄鳝免疫营养学研究资料,为黄鳝健康养殖提供依据。试验采用单因子试验设计,挑选体质健康、平均体重21.7土2.1g的黄鳝1080尾,随机分为6组,每组3个重复,每个重复60尾。对照组饲喂基础日粮(其中VD3为0IU/kg VD3),其余5个试验组在基础日粮中分别添加250、500、1000、2000和4000IU/kg的VD3。于投喂试验日粮后第20d、40d和60d,从各组随机选择6尾黄鳝,分别采集其肝胰脏、脾脏、头肾和后肠组织,采用RT-PCR技术检测内脏组织MHC-Ⅱ-B、 Hepcidin基因表达的影响；采用组织学方法观察饲喂日粮后第60d4种组织形态变化,采用流式细胞术检测4种组织细胞周期和细胞凋亡的变化；各饲喂周期,分别采集血样检测血液常规指标和免疫功能指标；并研究VD3对黄鳝生长和肠道消化酶活力的影响以及活菌攻毒后对黄鳝的保护作用。结果表明：(1)MHC-Ⅱ-B基因在4种组织的表达丰度依次为头肾、脾脏、后肠和肝胰脏,各组织间表达差异显著(P<0.05)；喂试验日粮后20d,VD3水平为4000IU/kg时显著增强头肾MHC-Ⅱ-B基因表达量,2000IU/kg则显著提高脾脏表达量(P<0.05)；投喂试验日粮后40d,VD3水平为1000IU/Kg时能显著增强除脾脏外其它3种组织基因表达量；饲喂期达60d时,较低水平(500IU/Kg)的VD3即能显著促使头肾和脾脏内MHC-Ⅱ B基因表达(P<0.05),高剂量(4000IU/Kg)VD3则抑制其表达。(2)hepcidin基因在4种组织的表达丰度依次为肝胰脏、脾脏、头肾、后肠,各组织间表达差异显著(P<0.05)；随VD3添加剂量增加,黄鳝抗菌肽hepcidin基因在4种组织的表达量同一时间点均呈现出先升高后降低的趋势；20d时,2000IU/Kg添加组4种组织的表达量均达到最高(P<0.05)；40和60d时,500IU/Kg处理组肝胰脏、头肾表达量达最高(P<0.05)；60d时,4000IU/Kg处理组的表达量反而明显下降(P<0.05)。(3)日粮VD3水平能明显影响黄鳝外周淋巴器官(组织)的组织学变化。低水平VD3日粮组：黄鳝脾脏视野中脾小体数目极少；头肾中仅见零星淋巴细胞稀疏分布于其造血组织间；肝胰脏组织结构完整,肝细胞排列紧密,肝细胞索明显；肠黏膜绒毛低矮,杯状细胞极少。中等水平VD3添加组：脾脏视野中白髓比列增大,较多脾小体清晰可见；头肾淋巴细胞、粒细胞增生,淋巴组织分布区域扩大。高水平VD3添加组：脾脏脾小体数目明显减少,并逐渐退化消失；可见大量淋巴细胞、粒细胞增殖,造血组织分布区域明显减小；肝脏局部细胞破裂溶解。(4)日粮VD3水平可显著影响黄鳝外周淋巴器官(组织)细胞周期和细胞凋亡。VD3对脾脏、后肠和头肾3种组织细胞周期和凋亡的影响变化趋势基本一致,适宜VD3水平(1000IU/kg)促进细胞增殖,减少细胞凋亡,有利于3种组织生长和发育；VD3缺乏和VD3过高,都会使细胞增殖受阻,凋亡发生率高。VD3对肝胰脏细胞增殖起抑制作用,添加水平越高抑制作用越强,同时高水平VD3诱导细胞凋亡(5)适宜VD3添加水平促进黄鳝RBC生成和HGB的合成,以及HCT、MCHC升高,PLT数目增多；并能显著提高.............

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